可見分光光度法
植物總酚（TP）含量檢測試劑盒說明書 貨號：YJS2309
規格：50T/24S
產品內容：
提取液：60%乙醇， 自備。
試劑一：液體 20mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體 25mL×1 瓶，4℃保存。
標準品：液體 1mL×1 支，4℃保存。1mg/mL 單寧酸標準溶液。
產品說明：
植物酚類物質具有清除自由基，抗氧化抗衰老的作用，具有較高的營養價值和醫療保健作用而 廣泛應用于化妝品、食品、醫藥等領域。
在堿性條件下，酚類物質將鎢鉬酸還原，產生藍色化合物，在 760nm 處有特征吸收峰，測 760nm 處的吸光值，即可得樣品總酚含量。
自備實驗用品及儀器：
天平、烘箱、粉碎儀、篩子、超聲破碎儀、60%乙醇、離心機、可見分光光度計、1 mL 玻璃比 色皿、蒸餾水。
操作步驟：
一、總酚提取
將樣本烘干至恒重，粉碎，過 40 目篩之后，稱取約 0. 1g ，加入 2.5mL 提取液，用超聲提取法進 行提取，超聲功率 300W ，破碎 5s ，間歇 8s ，60℃ , 提取 30min 。12000rpm ，25℃ , 離心 10min ， 取上清，用提取液定容至 2.5mL ，待測。
二、標準品制備：
將 1mg/mL 單寧酸標準溶液二倍稀釋至 0.3125、0.1562、0.0781、0.0391、0.0195、0.0098、0.0049、 0.0024 、0.0012 、0.0006mg/mL ，待測。
三、測定操作表
1 、分光光度計預熱 30min 以上，調節波長至 760nm ，蒸餾水調零。
2 、操作表
對照管 | 測定管 | 標準管 | 空白管 | |
樣本待測液 ( μL） | 50 | 50 | - | |
標準液 ( μL） | 50 | |||
蒸餾水 ( μL） | 50 | |||
試劑一 ( μL） | - | 250 | 250 | 250 |
混勻，室溫靜置 2min | ||||
試劑二 ( μL） | 250 | 250 | 250 | 250 |
蒸餾水 ( μL） | 700 | 450 | 450 | 450 |
混勻，室溫靜置 10 min， 1mL 比色皿，測定 760nm 吸光值。 | ||||
空白管只測一次。
四、總酚含量計算
1 、標準曲線繪制：
以不同濃度的單寧酸為 x 軸，ΔA（A 標準-A 空白）為 y 軸繪制標準曲線 y= kx+b。
2 、植物總酚含量計算：
將ΔA=A 測定-A 對照帶入標準曲線，求 x(mg/mL)。
（1） 按樣本鮮重計算
總酚含量（mg/g 鮮重）= x×V 提取÷W= 2.5x÷W （2） 按樣本
蛋白濃度計算
總酚含量（mg/mg prot）= x×V 提取÷（V 提取×Cpr）= x ÷Cpr
V 提取：提取液體積，2.5 mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣品質量，g。
注意事項：
（1）OD 值大于 1.0 ，樣品適當稀釋再測定，注意計算公式里乘以稀釋倍數。
（2）試劑一對皮膚有一定的刺激性，請操作時做好防護措施。
本產品僅供科學研究使用！請勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測等用途！
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