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本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人阿立新B（Orexin B）水平。用純化的人阿立新B（Orexin B）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入阿立新B（Orexin B），再與HRP標記的阿立新B（Orexin B）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的阿立新B（Orexin B）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人阿立新B（Orexin B）濃度。

樣品采集：收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集后當天進行檢測的標本，儲存在4℃備用，如有特殊原因需要周期收集標本，將標本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復凍融。標本2-8℃可保存48小時，-20℃可保存1個月。-70度可保存6個月。部分激素類標本需添加抑肽酶。ELISA原理實驗條件和技術要點

在應用ELISA時，首先要清楚下面內容：1，是檢測抗體還是抗原？2，檢測的結果是定性還是定量？3，是否需要檢測特異抗體的類型？4，所用抗體/單克隆抗體的親和力怎樣？

（1）檢測抗原 zui常用于檢測抗原的方法是非競爭性的雙抗體夾心法，其次是競爭法。但競爭法在具體實驗中有些困難，特別是檢測微生物的抗原，因為需要標記抗原，這對于某些抗原是很難做到的，甚至是不可能的。另外在競爭法中，酶標記的抗原與標本直接混合在一起，許多標本中含有酶抑制劑或蛋白A樣物質，可影響ELISA的結果。

（2）檢測抗體檢測抗體種類常用的方法是檢測抗體種類的捕獲法，這個方法常用于檢測特異性IgG、IgA和IgM.。這個方法的*步是捕獲所需要檢測的一個種類的抗體，接下來是檢測捕獲的抗體是否是特異性抗原的抗體。間接ELISA在檢測IgG時比較簡單，但不適用于檢測其他種類的抗體，因為血清中如果有特異IgG存在將與IgM或IgA等競爭結合抗原。